用银染色(Levaditi染色或Warthin-Starry染色)，直接或间接免疫荧光(director or indirect immunofluogical)，免疫过氧化物试验(immunoperoxidase testing)等来确定苍白密螺旋体是困难的，当通过组织学方式不能从结膜或巩膜肉芽肿内发现苍白密螺旋体，可根据荧光素标记抗体吸附试验(fluorescent treponemal antibody absorption，FTA-ABS)或梅毒螺旋体凝血试验(microhemagglutination assay for T pallidum，MHA-TP)阳性对梅毒性巩膜炎做出推测性诊断，中枢神经系统征象或心血管疾病也有助于诊断。
用于诊断梅毒的血清学试验还有玻片絮状试验，即美国性病研究室反应素试验(venereal disease research laboratory，VDRL)，梅毒螺旋体制动试验(T.pallidum immobilization,TPT)，快速血浆反应素卡片试验(rapid plasma-reagin card test，RPR)，自动反应素试验(automated reagin test，ART)等，血清学试验对各期梅毒病的阳性率见表1。
FTA-ABS和MHA-TP试验螺旋体抗体荧光吸附试验和梅毒螺旋体微量凝血试验除对一期，早期二期和早期先天性之外的各期梅毒最敏感，MHA-TP仅对麻风，复发热，系统性红斑狼疮，类风湿性关节炎和雅司病有17%或更低的假阳性，性病研究实验室试验(VDRL) 对三期梅毒不可靠，并有较高假阳性，FTA-ABS或MHA-TP对梅毒引起的巩膜炎或巩膜外层炎敏感，但不能说明活动性，FTA-ABS和MHA-TP阳性提示既往有梅毒史，已经治疗或潜伏期梅毒并发的特发性巩膜感染或表层巩膜感染，临床上对梅毒的适当治疗有效说明患者FAA-ABS和MHA-TP阳性由梅毒引起。
在三期梅毒出现的眼部损害包括巩膜炎或巩膜外层炎时，应仔细检查脑脊液中有无细胞，蛋白，并行VDRL试验，以排除神经梅毒。
由于梅毒患者可伴有HIV感染，所有梅毒性巩膜炎或巩膜外层炎患者都应检查HIV，以诊断有无AIDS，反之亦然。
B超，CT，MRI等可显示后部眼球壁的形态，局部增厚是后巩膜炎的重要表现，OCT可显示黄斑有无水肿。
