根据受累肌群的极易疲劳性，病情波动，朝轻夕重，神经系统检查无异常发现等，一般诊断并不困难，对可疑病人可做疲劳试验，即令病人做受累骨骼肌的重复或持续收缩(如重复闭眼，睁眼，咀嚼，举臂，握拳，两臂平举等)数十次可出现暂时性所检肌肉的瘫痪，若仍不能确诊者可结合肌电图重复电刺激和单纤维肌电图试验以明确诊断。
单纯眼肌型MG应与眼肌型肌营养不良症，先天性上睑下垂，Honer综合征和眼睑痉挛相鉴别，延髓肌无力者应与吉兰-巴雷综合征，进行性延髓麻痹等相区别，50岁以后起病的MG者，若临床表现为口干，泪少，晨重夜轻，或活动后反见症状减轻，受累范围以下肢为重，不管是否伴发肺部或其他部位肿瘤，均应考虑Lambert-Eaton综合征之可能，必须做进一步检查以资鉴别。
