血浆中游离核黄素，FAD和FMN都较恒定，测定无诊断价值，常以测定尿中维生素B2排出量作为诊断依据，由于收集24h尿液比较困难，目前常采用尿核黄素/肌酐测定和尿排泄负荷试验两种方法，此外，红细胞谷胱甘肽还原酶(erythrocyte glutathion reductase，EGR)的活性系数(activity coefficient，AC)测定因其灵敏，准确和简便的优点已广泛用于临床。
1.尿核黄素/肌酐测定：收集任意尿样，用每克肌酐相对量表示尿中维生素B2的排出量，结果<27μg/g肌酐者为缺乏，27～79μg/g肌酐者为不足。
2.尿排泄负荷试验：口服核黄素5mg后，收集4h尿液测定排出量，结果<400μg/4h尿者为缺乏，400～799μg/4h尿者为不足。
3.红细胞谷胱甘肽还原酶(EGR)的活性系数测定：EGR是一个以FDA为辅基的黄素蛋白，维生素B2缺乏时活性下降，如在体外把FDA加入含EGR的红细胞溶血液中，可使活性回升，回升后活性与原有活性的比值即为EGR的活性系数AC，AC值>1.20者为缺乏。
辅助检查
1.可做局部皮肤细胞学检查。
2.必要时做皮肤组织活检。
