1.性激素和促性腺激素测定
性激素和促性腺激素的分泌有明显的年龄特点，2岁前男，女儿童血中FSH，女童血中雌二醇和男童睾酮含量皆较高，而2岁后明显下降，至青春期开始后再度升高，青春发育开始前男童血睾酮<1.75nmol/L，雌二醇<37.5pmol/l;女童睾酮<0.7nmol/L，雌二醇<75.0pmol/L，真性性早熟时，LH，FSH升高，并有周期性变化，未完全建立周期性反馈关系之前出现昼夜波动，夜间睡眠时升高，特发性性早熟患儿血清FSH，LH，睾酮及雌二醇含量均较正常同龄儿升高，但由于正常高限与病理性低限有重叠现象，无严格的界限，故其诊断参考价值较少(尤其是早期)，必要时测定DHEAS，孕酮，17-羟孕酮，HCG，DHEAS与实际年龄和骨龄的关系能反映肾上腺功能初现，有助于真性性早熟的诊断，当促性腺激素未升高，而雌激素升高时应考虑卵巢或肾上腺肿瘤，若雄激素明显升高应考虑有异源性HCG分泌，血孕酮升高提示为黄体瘤。
2.GnRH或氯米芬兴奋试验
可了解下丘脑-垂体的功能状态。
(1)GnRH兴奋试验：真性性早熟注射GnRH后30min即见LH，FSH较基础值增高2倍或更高，而假性性早熟和下丘脑-垂体-性腺轴功能尚未完全成熟的真性性早熟，无反应或反应低下，乳腺过早发育者，该试验的反应为FSH峰值明显升高，而LH反应不明显，过去认为单纯促LH的反应情况，可鉴别单纯乳腺过早发育与中枢性性早熟，近年研究发现4岁以下单纯乳腺过早发育的婴幼儿，该试验LH反应高峰值可>20 U/L，因而认为4岁以下的婴幼儿不能单凭LH反应情况来鉴别单纯乳腺过早发育与中枢性性早熟，而要结合FSH对GnRH刺激的反应性进行判断，一般认为中枢性性早熟，GnRH刺激后LH/FSH>1，而单纯性乳腺早过发育，LH/FSH<1。
(2)氯米芬兴奋试验：对判断下丘脑-垂体-性腺轴成熟与否有一定价值，但目前已较少应用，试验前测FSH，LH作为基础水平，随后服用氯米芬100mg，连续5天，第6天复测FSH，LH后，若较基础值升高50%，说明下丘脑-垂体-性腺轴成熟，有助于鉴别真性与假性性早熟。
3.尿17-酮测定
先天性肾上腺皮质增生或肾上腺癌患者，尿17-酮增加，可行地塞米松抑制试验，肾上腺癌患者尿17-酮增加不能被小剂量地塞米松抑制，先天性肾上腺皮质增生按不同类型有血浆17-羟孕酮升高，血浆11-去氧皮质酮升高，尿孕三醇增加。
4.FT3、FT4和TSH测定有助于反映甲状腺功能。
5.阴道脱落细胞涂片检查雌激素水平，真性性早熟者，雌激素水平呈周期性变化，而假性性早熟者呈持续性升高。
6.基础体温如为双相，提示有排卵，为真性性早熟，目前无相关资料。
其他辅助检查：
1.左腕部X线照片测定骨龄，骨龄超过实际年龄2岁以上者考虑为性早熟，骨龄延迟者提示甲状腺功能低下。
2.蝶鞍X线照片，眼底，视野检查等，有助于了解有无颅内病变，鞍上钙化提示颅咽管瘤，松果体钙化并蝶鞍扩大，变形提示颅内肿瘤，颅内肿瘤可引起眼底视盘水肿和视野改变。
3.脑电图，脑地形图 脑器官性病变时，常有异常改变，部分特发性性早熟患儿，脑电图出现弥漫性异常，包括不正常的慢波伴阵发性活动以及尖波，棘波等改变。
4.腹部和盆腔B超检查，可了解肾上腺和卵巢，子宫大小及形态，以及卵巢情况。
5.CT和MRI检查：CT和MRI头部检查可了解颅内病变，特别有助于明确颅内肿瘤，对于排除继发性真性性早熟亦有重要价值，而特发性真性性早熟上述检查均正常，对于鉴别肾上腺肿瘤及卵巢肿瘤也有重要价值。有人在用MRI诊断中枢性性早熟时，根据垂体上部表现凹面程度进行分级(1级明显凹陷，2级轻度凹陷，3级扁平，4级轻度凸出，5级明显凸出)，认为垂体分级对青春期前期儿童性早熟诊断有重要价值，4级以上者可高度怀疑中枢性性早熟可能。
