刮取角膜溃疡区的分泌物或坏死组织进行涂片及革兰染色检查，可发现较细小的革兰阴性杆菌，铜绿假单胞菌在琼脂培养基上生长迅速，有时24h即可出现菌落，一般菌落较大，呈圆形，边缘稍不齐，外观黏稠，为寻找病因可对患者应用过的眼药水及手术器械进行细菌培养。
在角膜浸润严重，无法观察眼内情况时，可行B超检查明确球内病变。
