1.病毒分离：大多数埃可病毒可用猴肾细胞培养分离，如加用人胚肺细胞株W1～38则效果更好。
2.血清学检查：恢复期血清抗体效价比急性期升高4倍有诊断价值，中和实验是最常使用的病毒鉴定方法，部分血清型如3，6，7，11～15，19～21，24，29型可用血凝抑制试验进行诊断，用聚合酶链反应检测病毒RNA是快速敏感的方法。
3.中和试验或免疫荧光法检测，多种混合多价血清快速灵敏。
