测定血或尿中丙酸及其代谢产物浓度，以及白细胞或成纤维细胞中丙酰辅酶A羧化酶活性，由于丙酸积聚亦可见于甲基丙二酸代谢缺陷病人，故酶活性测定才能最终确诊，对高危新生儿测定脐血中酶活性可立即诊断，通过测定培养羊水细胞或绒毛膜绒毛组织酶活性，或羊水中甲基枸橼酸水平可进行产前诊断，培养成纤维细胞中丙酰辅酶A羧化酶缺乏或几乎完全缺乏。
脑电图，脑CT检查，可见异常脑波，脑萎缩，腹部B超可见肝脏肿大，X线检查可见骨质疏松。
