1.新生儿期筛查
大多应用Guthrie细菌生长抑制法筛查本病，当血中亮氨酸浓度>4mg/dl(305µmol/L)时，应进一步检测尿中支链酮酸排出量。
2.生化检测
对临床拟诊患儿应进行电解质和血气分析，如有代谢性酸中毒和阴离子间隙增宽，应进行血和尿液的氨基酸和有机酸分析，部分患儿在急性期可有低血糖。
3.氨基酸和有机酸分析
应用GC-MS对患儿的血，尿或脑脊液中氨基酸和有机酸的定量检测可确诊：
(1)血中支链氨基酸和支链有机酸水平增高。
(2)在急性期，血中α-酮异戊酸浓度增高，尿液中α-羟异戊酸增高。
(3)血中可检出本病特有的L-别异亮氨酸(L-alloisoleucine)。
4.酶学检测
可检测培养的成纤维细胞，淋巴母细胞支链酮酸脱氢酶复合体的活力。
5.DNA分析
对已知突变类型的家庭成员，可用PCR扩增DNA后用标记的寡核苷酸探针检测。
智力检查水平降低，脑电图检查可见异常脑波形，脑CT检查可发现急性代谢紊乱所致脑水肿等。
